川崎市における手足口病の発生状況は例年に比べて１カ月ほど遅く、2004年７月になってから患者が増加し始めた。流行のピークは７月の第５週で、例年に比べて小規模な流行となっている。当所において８月に手足口病を発症した患者の咽頭ぬぐい液５検体が搬入され、そのうち３検体（残りの２検体は検査継続中）からコクサッキーウイルスＡ16型（CA16）が分離されたので報告する。
この３名（No.30、No.33、No.34）の患者はいずれも本市高津区内の３歳の男児で、８月２日〜６日の期間に同一の医療機関を受診しており、地域的な流行が考えられた。検体をVeroおよびCaCo-2細胞に接種したところ、両細胞で明瞭なCPEが認められた。増殖したウイルスについて、国立感染症研究所から分与されたCA16とエンテロウイルス71型（EV71）の抗血清による中和試験を行ったが、中和されず判定することはできなかった。そこで、篠原ら（感染症学雑誌 73: 749-757, 1999）のプライマー（P2、E33）を用いたRT-PCRを行い、シーケンサーにより塩基配列を決定し、構造遺伝子のVP4（207bp）領域についてBLAST検索で同定を試みた。また、山崎ら（感染症学雑誌 75: 909-915, 2001）の方法による血清型別が可能なRT-PCRについても併せて行った。
シーケンスの結果、VP4遺伝子の相同性はNo.30とNo.33で 100％（207/207）一致した。しかし、No.30とNo.34は相同性94.7％（196/207）で配列の違いが見られたが、アミノ酸に置換したところ３検体は 100％一致した。BLAST検索の結果、No.30とNo.33はAB094772(CA16/Kanagawa/V-15487/98）と97.6％（202/207）、No.34はAJ297109（CA16/Epsom/15290/99）と99.0％（205/207）一致した（図）。また、血清型別RT-PCRではCA16特異的プライマーでのみ増幅が認められ、３検体ともCA16と同定された。
近年、CA16とEV71の難中和性が多く報告され、当所においても手足口病については２年前からVP4遺伝子の相同性を比較することで同定を行っている。しかし、系統樹解析や相同性検索ができる利点があるものの、手技の煩雑さ、高コストなどの欠点もある。今回用いた血清型別RT-PCRはCA16遺伝子を特異的に検出することが可能であり、血清型別のみの検索であれば、簡単かつ迅速に検査を行えるものと考えられる。
川崎市衛生研究所 清水英明 奥山恵子 植田葉子 平位芳江 小川正之
今月の表紙へ戻る
IASRのホームページに戻る
Return to the IASR HomePage(English)
