2008年3月、大阪市において下気道炎症状を示した乳幼児6名からヒトボカウイルス (human bocavirus; HBoV) の遺伝子を検出したので報告する。
HBoVは、2005年、スウェーデンにおいて呼吸器感染症患者の鼻咽頭液を用いたスクリーニングにより発見されたウイルスであり、パルボウイルス科パルボウイルス亜科ボカウイルス属に分類される1)。従来、ヒトに病原性を示すパルボウイルスは、パルボウイルス亜科エリスロウイルス属に分類されるパルボウイルスB19（伝染性紅斑の病原体）のみであった。HBoVは、ヒトに疾患を引き起こす2番目のパルボウイルスと考えられている。発見後、世界各地で主に乳幼児の呼吸器感染症患者から検出が報告されている。また、患者の血液中からもHBoVが検出されること、他の呼吸器ウイルスとの複数検出率が高いことが明らかとなっている2) 。血清中の抗HBoV抗体の調査結果から、5歳までには、ほとんどの人がHBoVの初感染を受けることが示唆されている3)。一方、呼吸器疾患を示さない胃腸炎症状の患者の糞便からも検出が報告されており、病原性との関連が注目されている4)。
大阪市でHBoVが検出された6名の患者情報を表に示す。いずれの検体もVero、RD-18S細胞を用いたウイルス分離検査は陰性であった。そのため、QIAamp Viral RNA Mini Kit (QIAGEN) を用いてウイルスRNA を抽出後、SuperScript III (Invitrogen) を用いて、cDNA を合成し、RSウイルス、ヒトメタニューモウイルス (hMPV) 、パラインフルエンザウイルス1、 2、 3型の遺伝子検査をおこなった。その結果、1検体 （患者C）がRSウイルス陽性、1検体（患者E）がhMPV 陽性であった。しかしながら、他の検体はすべて陰性であったため、HBoVの遺伝子検査をおこなった。QIAamp Viral RNA Mini Kit により得られる抽出物については、DNAウイルスの遺伝子検査に用いることが可能である 5)。そのため、キットの抽出物および、Allander ら 1) が報告したプライマーペア188F (5´-GACCTCTGTAAGTACTATTAC-3´)、542R (5´- CTCTGTGTTGACTGAATACAG-3´) およびTaKaRa Ex Taq ® Hot Start Version (TAKARA) を用いて、94℃ 2min の処理後、94℃ 30s、 54℃ 30s、 72℃ 1min の反応を40サイクルおこなった後、アガロース電気泳動により生成物を確認した。その結果、増幅された断片はすべて予想サイズ（354bp）付近に検出された。PCR産物を精製後、ダイレクトシークエンスにより塩基配列(290塩基)を決定し、BLAST (http://blast.ddbj.nig.ac.jp/top-j.html) による相同性検索をおこなった結果、いずれもHBoVの配列であることが判明した。検出された6株間の塩基配列の相同性は、100%であった。
今回、大阪市でHBoVが検出された検体は、HBoV単独検出が4検体、RSウイルスとの複数検出1検体、hMPV との複数検出1検体であった。4検体については、単独検出であるためHBoVが病原体である可能性が高いことが示唆された。しかしながら、現在までのところ、HBoVの病原性に関する知見はほとんど得られていない。他の呼吸器ウイルスとの複数検出率が高いことの意味も不明である。今後の研究の進展によりHBoVの病原性が解明され、疾患との関連が明らかにされることが期待される。一方、HBoV感染症を臨床面、ウイルス学的観点から理解する上で、さらなる疫学情報の蓄積が重要であると考えられる。
引用文献
1) Allander T, et al ., Proc Natl Acad Sci USA 102: 12891-12896, 2005, Erratum in: Proc Natl Acad Sci USA 102: 15712, 2005
2) Allander T, J Clin Virol 41: 29-33, 2008
3) Endo R, et al ., J Clin Microbiol 45: 3218-3223, 2007
4) Vicente D, et al ., Emerg Infect Dis 13: 636-637, 2007
5) Neske F, et al ., J Clin Microbiol 45: 2116-2122, 2007
大阪市立環境科学研究所
改田 厚 久保英幸 入谷展弘 後藤 薫 長谷 篤
医療法人真美会 中野こども病院 木全貴久 圀府寺 美
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