過去に食中毒を疑った集団胃腸炎事例において、ノロウイルス等の検査のために採取・保管されていた糞便試料を用い、アストロウイルス（AstV）の検索を行ったところ、血清型８型のAstVが分離されたので、その概要について報告する。
AstVの検索を行ったのは、2008年２月および３月に長野県内の同一地区の２施設において採取された従事者糞便とした。これら２事例は、少なくともノロウイルスあるいはサポウイルス、もしくはその両者が関与していたと考えられた（表１）。まず、糞便９検体の乳剤上清からRNAを抽出し、Sakonら 1)の報告したRT-PCR法（プライマーセットAC1/AC230）によるAstV遺伝子の検出を行ったところ、５検体が230bp付近に増幅産物を認めたことから（図１-A、表１）、AstV陽性と判定した。そこで、ウイルス性下痢症診断マニュアル（第３版）2)に準じ、CaCo-2細胞を用いてウイルス分離を行ったところ、いずれも継代第２代までに細胞変性が認められた（表１）。分離株は、Sakamotoら 3)の報告したRT-PCR法（プライマーセットAST-S1〜AST-A8/END）により血清型別を行った結果、５検体とも600bp付近に増幅産物を認めたので、血清型８型と同定した（図１-B）。さらに、検体No.19-48-4、20-1-1および20-1-5から分離されたAstV株は、AST-S8/ENDプライマーセットでPCR増幅し、その増幅されたORF2の3'末端付近の一部領域をダイレクトシークエンス法により、塩基配列の決定をした。３株の塩基配列は100％一致しており、BLAST検索の結果、中国で分離された血清型８型のAstV（accession no. EU091262）と最も高い相同性（98％）が認められた。また、この株を含む血清型８型株を用い系統樹解析を行ったところ、長野県分離株は前述の中国分離株の他に、ハンガリー分離株（HUN-8）あるいはアメリカ分離株（Hu/HAstV_8/2701/1999/OH,USA、Hu/HAstV_8/3383/1999/OH, USA）と近縁であった（図２）。一方、同じ血清型８型であっても、イギリス分離株（hav8001）、南アフリカ分離株（AS20）およびメキシコ分離株（Yuc-8）とは、遺伝学的に離れた位置に存在した（図２）。
AstVは一般的に小児、特に１歳未満の下痢症の原因ウイルスとして知られており、大人から検出されることは稀である 4)。また、過去（1997年以降）の病原微生物検出情報の集計では、分離されるAstVの主な血清型は１型、４型、５型で、８型が検出されたのは今回が初めてのことであった。また、海外においても、分離されたAstVの血清型は１型が最も多く、わが国の成績と同様の傾向を示している 5-8)。血清型８型の検出割合は、Guixら 7)の報告では10.7％と比較的高かったものの、それ以外では0.0％〜2.5％と低率であった 5, 6, 8)。今回分離されたAstV 5株はいずれも分離された場所や時期も似かよっており、また、異なる事例から分離された株のORF2の一部領域の配列が同じであったことから、分離株の由来は同一であった可能性が強く示唆された。さらに、同一由来のAstV株が非常に狭い地区内において、地域的な流行を継続して起こしていた可能性も推察された。AstVが分離された従事者５名中４名は、聞き取り調査の結果、過去１週間遡っても下痢等の胃腸炎症状を認めず、不顕性感染者であったと考えられた。５歳未満の小児においても、不顕性感染者が2.6％存在したとの報告があり 9)、いずれも重要な感染源の一つと考えられた。
AstV血清型８型における疫学的データは非常に少ないことから、今後もその発生動向等に注視する必要があると思われる。
貴重な疫学データ等を提供いただいた、保健所の関係各位に深謝いたします。
文 献
1) Sakon N, et al ., J Med Virol 61: 125-131, 2000
2)ウイルス性下痢症診断マニュアル（第３版）, 国立感染症研究所ウイルス第二部・衛生微生物技術協議会レファレンス委員会, 2003
3) Sakamoto T, et al ., J Med Virol 61: 326-331, 2000
4) Bini JC, et al ., Bull Soc Pathol Exot 100: 243-245, 2007
5) Noel JS, et al ., J Clin Microbiol 33: 797-801, 1995
6) Mustafa H, et al ., J Clin Microbiol 38: 1058-1062, 2000
7) Guix S, et al ., J Clin Microbiol 40: 133-139,2002
8) Chun-yan L, et al ., Chin Med J 117: 353-356, 2004
9) Mendez-Toss M, et al ., J Clin Microbiol 42: 151-157, 2004
10) Kageyama T, et al ., J Clin Microbiol 41: 1548-1557, 2003
11) Okada M, et al ., Arch Virol 151: 2503-2509, 2006
長野県環境保全研究所
吉田徹也 粕尾しず子 畔上由佳 内山友里恵 薩摩林一代 白石 崇
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