今回、非流行期の2005年８月２日に採取された小脳炎疑いの患者の検体から、インフルエンザウイルスAH3型を分離したので、その概要について報告する。
患者の概要：患者は11歳男児で、2005年７月31日より発熱。８月１日より頭痛が出現した。８月２日朝、四肢を硬直させ口唇をガクガクさせ、フラフラと歩いており、近医を受診した。意識はあるものの反応が鈍い状態であり、Ｍ市民病院を紹介受診した。入院時はボンヤリした状態であったが氏名・年齢は言えた。発熱38℃、頭痛、悪心、咽頭発赤を認めた。脈拍 96、血圧 129/87、呼吸音：清、項部硬直（±）、Kernig（＋）であった。アキレス腱反射：正常範囲内、膝蓋腱反射：軽度減弱であった。起立試験、踵・膝試験で閉眼すると動揺が増強した。入院時血液検査所見は、WBC 6,500/μl、CRP 4.37mg/dl、赤沈：１時間値 13mm、２時間値 30mm、生化学検査正常、検尿正常であった。入院時髄液検査所見は、細胞数 0/mm3、蛋白 18mg/dl、糖 67mg/dlであった。入院時頭部ＣＴ所見は正常範囲内であった。入院後の経過は、入院時の発熱は38℃であったが、抗菌薬使用後、翌日より解熱した。ふらつきも翌日には消失し、起立試験、指・鼻試験、踵・膝試験も正常となった。経過中、明らかな咳、鼻汁などの感冒症状、関節痛、筋肉痛等は認めなかった。
ウイルス分離同定の経過：感染症発生動向調査の検査定点であるＭ市民病院で、８月２日に髄液と咽頭ぬぐい液を採取し、凍結保存後、８月８日に当研究所に搬入された。処理後、MDCK細胞とHEp-2細胞に接種した。MDCK細胞の培養は浮遊培養法で行った。細胞変性効果（CPE）と赤血球凝集（HA）試験でウイルス分離の確認を行った。咽頭材料を接種したMDCK細胞で、接種後４日目にCPEが認められた。モルモット0.75％赤血球でHA価２倍で、不安定な凝集が認められた。MDCK細胞２代ではCPEは認められたが、HAは認められなかった。ニワトリ、ガチョウ赤血球でもHAは認められなかった。インフルエンザ迅速診断キットで、分離ウイルスはインフルエンザウイルスＡ型であることを確認したが、充分なHA価が得られなかったため、通常の赤血球凝集抑制（HI）試験での同定を行うことができなかったので、RT-PCR法で同定を行った。HA遺伝子は国立感染症研究所（感染研）推奨の方法、NA遺伝子は高尾らが推奨した1)Wandong Zhangらの方法で増幅した。AH3とNA2に特異バンドを認め、分離ウイルスはインフルエンザウイルスA/H3N2型と同定した。MDCK細胞の３代でもCPEは認められたが、HAは認められなかった。MDCK細胞（単層培養）に継代して、４代で安定したHA価16倍が得られたので、感染研分与のインフルエンザサーベイランスキットを用いて、赤血球凝集抑制（HI）試験でも同定を行った。分離ウイルスの抗原性は、抗A/New Caledonia/20/99 （ホモ価 320）に対してHI価＜10、抗A/Moscow/13/98（同 2,560）に対して＜10、抗A/Panama/2007/99（同 640）に対して20、抗A/Wyoming/03/2003 （同 1,280）に対して80、2005/06シーズンのワクチン株の抗A/New York/55/2004（同 5,120）に対して640であった。この成績から、分離ウイルスは今シーズンのワクチン株に近い株であると思われた。確認のため、抗B/Johannesburg/05/99（同 2,560）、抗B/Brisbane/32/2002（同 320）に対してもHI試験を行ったが、いずれも＜10であった。
疫学的事項：母が８月３日、弟が８月５日、妹が８月６日、祖母が８月７日より発熱し、家族内感染が疑われたが、確認はできていない。祖母のみインフルエンザワクチン接種済みであった。海外渡航歴は本人、家族はなかった。母の姉が2005年７月23日〜25日にグァム旅行をしており、祖母とは７月25日に、他の家族とは７月26日とその数日後に接触しているが直接の関連は不明である。
今回の症例では、臨床症状だけではインフルエンザとは診断し難く、非流行期においても、インフルエンザウイルスの分離を行い、インフルエンザの動向を把握することが重要であると思われる。また、今回のウイルス分離同定では、分離初期では、十分なHA価が得られず、通常の赤血球凝集抑制（HI）試験での同定を行うことができなかったため、同定に時間を要した。これは、培養法によるものか、ウイルス自身の性質なのかは明らかではない。
文 献
１）IASR 23(11): 287-288, 2002
名古屋市衛生研究所・微生物部 後藤則子 柴田伸一郎 木戸内 清
名古屋市立緑市民病院・小児科 加藤敏行 尾坂行雄
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