当所で開発したRT-LAMP法を用いて、AH3型を迅速に診断できたので報告する。プライマーは栄研化学のソフトであるLAMP primer designを用いてAH1型、AH3型のHA regionより作製した。このプライマーと栄研化学のRNA増幅試薬キットを用いてRT-LAMP法を行った。検体からの検出率（sensitivity）は迅速診断キットを上回っており、亜型間のspecificityにも問題はなかった（第79回日本感染症学会報告済、現在論文投稿中）。
症例１：30歳男性、タイ在住、貿易関係の仕事に従事しており、トリとの接触歴はない。2005年８月５日（金）に一時帰国し、その夜より発熱。６日（土）には38.5℃の発熱があり、咽頭痛、筋肉痛を出現したため、７日（日）にＡ病院の休日外来を受診した。迅速診断キットにてＡ型インフルエンザと判明、オセルタミビルを処方し、帰宅させた。８日（月）にＡ病院より神戸市保健所に届出があり、迅速診断のための検体が保存されていたことより、保健所の指示のもと、当研究所に検体が搬入された（午後２時）。
直ちに、P3レベルの実験室で、QIAmp Viral RNA Mini Kit(QIAGEN)を用いて、RNAを抽出し、RT-LAMP法にてAH1およびAH3の検出を行った。同時に、陽性コントロール［AH1、AH3が分離された咽頭ぬぐい液（−70℃保存）］と、陰性コントロール（HANKS液）からのRNA抽出を行い、RT-LAMP法を実施した。結果、AH1検出法ではAH1陽性コントロールが、AH3検出法では当該検体とAH3陽性コントロールが陽性となったため、保健所にAH3型の旨の報告を行った（午後４時半）。同時にMDCK細胞で培養を開始し、２日目にウイルスが分離された。HI試験により、A/Wyoming/3/2003と抗原性類似のウイルスであることが判明した。
症例２：31歳男性、2005年９月22日〜26日までタイへ旅行し、バンコクに滞在した。トリとの接触歴はない。９月27日（火）より発熱、９月29日（木）午後にＢ病院救急外来を受診した。高熱、悪寒、戦慄、咽頭発赤あり。WBC 6,100/mm3 、CRP 7.3mg/dl。溶連菌感染症、インフルエンザなどが疑われた。迅速診断キットにてＡ型インフルエンザと判明したため、Ｂ病院より直接、当研究所に連絡があり、検体が当研究所に搬入された。９月30日（金）朝よりRNA抽出し、RT-LAMP法を施行し、AH3型と判明したので、Ｂ病院に報告した（午前11時）。同時にMDCK細胞で培養を開始し、３日目にウイルスが分離された。HI試験により、A/Wyoming/3/2003と抗原性類似のウイルスであることが判明した。
RT-LAMP法導入により、検体搬入から結果判定までは２〜３時間で行うことが可能となったのでここに報告する。
神戸市環境保健研究所 中川直子 伊藤正寛
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