（事務局註：1986年から本月報において仙台病院のウイルス分離報告が集計されています。）



　急性気道感染症（ＡＲＩ）はインフルエンザ，パラインフルエンザ，ＲＳ，アデノ，ライノ，エンテロなど他種類のウイルスを病因とする症候群である。したがって，ＡＲＩから病因ウイルスを分離するためには，それぞれのウイルスに感受性のある何種類かの細胞を使用しなければならない。これは大変な仕事量である。そのため，ＡＲＩは最も日常的なウイルス感染症であるにもかかわらず，病院の検査室ではルチン検査として行われていない。また，各地の衛生研究所においてもインフルエンザ以外にはウイルス分離によるＡＲＩの疫学解析は行われていない。

　われわれはこの問題を解決するために，分離法の簡便化を考え，マイクロプレート法を考案した。これを用いて，1984年12月から現在まで小児ＡＲＩからのウイルス分離を行ってきたが，実用的に極めてすぐれていることが証明されたので，方法を簡単に紹介し，われわれの分離成績を報告する。

　方法：マイクロプレートを横に使い，４種類の細胞（ＨＥＬ，ＨＥｐ−２，Vero，ＭＤＣＫ）を２列ずつ接種する（頭文字をとって，ＨＨＶＭプレートと呼んでいる）。咽頭拭い液0.1mlを縦１列（４種細胞各２穴）に接種し，維持液0.1mlを加えて培養する。VeroとＭＤＣＫの維持液にはパラインフルエンザおよびインフルエンザウイルスを分離するために，トリプシンを加える。１枚のマイクロプレートに11件接種できる（詳細は第27回臨床ウイルス学会に報告，感染症学会雑誌60巻９号に掲載予定）。

　成績：1984年12月から1985年12月までの間に，仙台市スペルマン病院小児科で毎日約10例の小児ＡＲＩから採取された咽頭拭い液を，その日の内にプレートに接種した。

　2,310例の材料から657株（28％）のウイルスが分離された。表１に657株のウイルスがＨＨＶＭプレートのどの細胞で分離されたかを示した。インフルエンザＡ，ＢはＭＤＣＫで，ＲＳはＨＥｐ−２，パラインフルエンザ，ムンプスはVero，アデノは主としてＨＥＬとＨＥｐ−２，エンテロはＨＥＬ，ＨＥｐ−２，Veroで，ヘルペスはＨＥＬ，ＣＭＶはＨＥＬでそれぞれ分離された。すなわち，同定された22種類のウイルスと未同定のエンテロ54株がＨＨＶＭプレートで分離された訳である。分離陰性材料をＭＫで再分離したが，追加分離されたのはわずかに39株であり，エンテロが38株の他はパラインフルエンザが１株だけであった。すなわち，ＨＨＶＭプレートで主な呼吸器ウイルスは分離できることがわかった。

　表２に季節別の分離状況を示した。小児ＡＲＩの臨床材料からインフルエンザが高率に分離され，Ｂ型の流行期間中にＡ型が混ざっていたり，Ｂ型の流行後に散発的にＡ型が検出されるなど興味ある知見が得られた。他にも耳下腺炎のないＡＲＩからムンプスが分離されたり，小児ＡＲＩから分離されるアデノがほとんど１，２，３型であるなどの知見も得られるなど，ウイルス分離による疫学解析が容易になった。エンテロの同定は現在進行中であるが，抗血清の入手に問題がある。いつでも抗血清が入手できるよう，予研腸内ウイルス部を始め関係各位の御配慮を切にお願いする。

　終りに：マイクロプレート法は大量処理を目的として改良されたものであり，少数例または特別な材料を検査するときはチューブを用い慎重に分離すべきであることは言うまでもない。



国立仙台病院ウイルスセンター　沼崎　義夫，大島　武子，近江　彰
スペルマン病院小児科　小松　茂夫


Table 1.Number of isolates in HHVM and MK plates
Table 2.Viruses isolated from infants and children with ARI employing the microplate method