福岡市では，平成8（1996）年6月14日〜28日にかけて，保育園児37名とその家族等11名（計48名）のO157集団感染症が発生した（原因は未解明）。また，散発事例は市内全域で発生しており，6月下旬〜8月上旬までですでに約30例に及んでいる。このような状況を受けて，現在，市販食品等からの腸管出血性大腸菌（以下VTECと略）の一斉検査を行っているが，そのうち生食用レバー等からVTECが7例検出されたのでその概要を報告する。

　検査方法:検査方法は，O157のみではなくVTECを対象とするため，Karmali，M.S. らが報告（J. Clin. Microbiol.，22，614，1985）した「コロニー掻き取り法」を用いて図1の方法で行った。

　分離培地には亜テルル酸カリ含有（2.5mg／l）SMAC（Zadik，P.M. ら，J. Med. Microbiol.，39，155，1993）がVTECの選択性に非常に優れているため，SMACと併用して用いた。SIBを用いる場合は，平板上でのVT1の産生が悪くRPLA法でのVT検出には不適であったが，PCRを用いる場合には支障がなかったので，場合によっては併用した。また，「コロニー掻き取り法」のRPLA法では時々非特異凝集が見られる場合があったため，未感作ラテックスの凝集の有無のチェックを必ず行った。VTEC株を探す際のコロニー釣菌は，操作が簡便なため滅菌爪楊枝による釣菌を行った。大腸菌株の選別には，2枚の平板［シモンズクエン酸培地とフルオロカルト寒天（メルクジャパン）］に塗布する方法を用い，1検体当たり約100個のコロニー釣菌を行った。なお，O抗原およびH抗原の血清型別は市販「病原大腸菌血清型別セット」（O抗原用またはH抗原用;デンカ生研）を，RPLA法は「ベロ毒素検出用RPLAキット」（デンカ生研）を，PCR法は「VT遺伝子検出用プライマーセット」（TaKaRa）をそれぞれ用いて行った。

　検査結果：7月17日〜8月7日に保健所が収去した食肉類（内臓類，牛豚鶏肉，食肉加工品等）90件中7件（7.8％）からVTECが検出された。検体別の陽性数および検出されたVTECの型を表1に掲げた。VTECは，生食用牛レバー1件からO157:H7（VT1＋VT2）が，牛せんまい1件からO157:H7（VT2）とO群不明:H−（VT1）が，牛その他内臓（大腸）1件からO157:H7（VT1＋VT2）が，牛ホルモンミックス1件からO157:H7（VT1＋VT2）が，牛さがり肉1件からO群不明:H−（VT2）が，ラム肉（密封包装品）1件からO群不明:H−（VT1＋VT2）がそれぞれ検出された。

　まとめ:O157検査法としては，SMACまたはSIB平板上のソルビット非分解コロニーを釣菌する方法や，O157抗体を利用してELISA法により検出する方法または磁気ビーズにより集菌する方法が示されている。

　ヒトの下痢症から分離されるVTECはO157以外にもO26やO111など多数の血清型が知られており，それらはO抗原の種類だけでも30種を超えている（竹田，食品衛生研究，41（7），7，1991，伊藤，モダンメディア，39，307，1993）。

　私どもが今回行った「コロニー掻き取り法」は，O157以外のVTECの検出も可能であり，その含有比率が大腸菌コロニーの1％程度でも検出が可能であった。今回の成績でも，VTECが検出された7例のうちすべてで，釣菌した100コロニー中，VTECは1〜4個程度の検出率であり，微量のVTECの検出やO157以外のVTECの検出も可能であった（なお，今回分離したVTEC，O群不明株は現在，予研に型別を依頼している）。



福岡市衛生試験所　小田隆弘　椿本　亮 池田嘉子　財津修一


図1　食品からのVTEC検出法
表1　食肉類からのVTECの検出数