本月報第７巻第９号（79号）に掲載された本邦最初の乳児ボツリヌス症発生の報告について，ボツリヌス症確認のための毒素および菌の検索状況を追加報告する。

　船橋中央病院から千葉県血清研究所がボツリヌス症を疑われる乳児の便について菌検査を依頼されたのは，来院から約２週間後の1986年６月９日であった。ただちに，便に３倍量のＰＢＳを加えて懸濁させ，その3,000回転遠心上清0.5mlをマウス腹腔内に注射した。同時に，注射量中約50単位のレベルで，ボツリヌスＡＢＥＦ多価抗毒素での中和を試験した。翌朝６月10日の観察では注射したマウス全部が死亡していた。抗毒素の効果がなかったので，一時はボツリヌス症の疑いを捨てたものの，再度，検体を希釈して試験した結果，検体0.1mlを静注したマウスに，注射後70分で明らかにボツリヌス特異の症状が観察され，Ａ型抗毒素を同時に注射したマウスだけが，６月11日に生残していた。患児の臨床症状はそれほど重度ではないと聞いていたので，中和試験で抗毒素の効果がないほど多量の毒素が便中に産生されているとは予想できなかった。その後２ヶ月間，数回にわたり，便中の毒素量を測定したが，便１ｇにつき最高10⁵マウスＬＤ₅₀という強い毒素が検出された。なお，毒素は７月19日まで便中に証明された。

　毒素検出と並んで，６月９日の便をクックトミートで培養したものから菌の分離を試みた。クックトミート（以下ＣＭＭと略す）から６月10日ＧＡＭプレートに移植し，６月12日にコロニーを釣って菌のＰＢＳ浮遊液を作製し，マウスに0.1mlずつ注射した。マウスに毒性を示したコロニーを再びＣＭＭに植え継ぎ，検鏡して，単一と見られる培養を得ることができた。この培養はマウスに0.1ml静脈注射して注射後１時間でマウスを殺す毒素を産生していた。単離した菌は凍結乾燥して保存した。

　病院から便と一緒に，患児に与えたミルクとハチミツの残り，使用した哺乳瓶の乳首，家内および家の周囲から集めた塵介，家族３名の便が届いた。これらの検体はＣＭＭに植え，培養５日および７日後の毒力を測定した。毒素を確認した培養についてはＡ型抗毒素での中和を試験した。ハチミツ，哺乳瓶の乳首，電気掃除機で集めた塵からＡ型毒素を検出した。ハチミツの培養からは便の場合と同様にＡ型菌を単離することができた。

　患児の入院２週間後に採血した血清について毒素検出を試みたが，検出レベル以下であった。なお，血中抗毒素の有無を調べたが，血清0.5mlで５マウスＬＤ₅₀のＡ型毒素を中和することができなかった。

　患児は哺乳力は弱いものの便中に菌が検出されなくなるとともに回復し，８月22日に退院したと病院から知らせがあり，調査を終了した。



千葉県血清研究所製造３科（ボツリヌス室）